验证慢病毒包装质粒酶切，慢病毒包装的载体和普通质粒的区别

Pannarase是一种来自于粘质沙雷氏菌，经基因工程改造的核酸内切酶，能够将各种类型的DNA和RNA降解成35个碱基长度的5-单磷酸寡核苷酸，又被称为全能核酸酶。广泛用于疫苗、细胞与基因治疗等领域的病毒纯化工艺，产品特点：杰出单位比酶活非His标签纯化质谱均一性认证无动物源严格的指控标准、低内毒SEC-HPLC：如下图尺寸排阻色谱显示高纯度，无聚集体产生LC-MS检测：如下图液质联用分析蛋白分子与理论值一致，无杂质峰，结构均一应用案例：对质粒DNA的酶切活性对比不同品牌核酸酶的酶切效果图如下图运输和保存方法：干冰运输。

使用方法：1.对于大肠杆菌破碎液为了达到降低粘度的目的，加入核酸酶的用量须根据破碎液的菌体浓度来决定，如果菌体浓度在50%，建议加入的核酸酶的量为1：1000-5：1000，即50万-250万U/L。如果菌体浓度在5%，则可以按照1：10000-5：10000的比例加入。2.对于细胞裂解液可以按照106-107个细胞加入500单位核酸酶。

已有质粒怎么慢病毒包装构建稳定细胞株一种是脂质体转染后,单克隆筛选稳定细胞株.另外一种是应用逆转录病毒,慢病毒转染,筛选稳定细胞株.脂质体转染：在转染24小时后,消化细胞并计数.将细胞种到96孔板,保证每个孔23个细胞,这样才能得到单克隆.待细胞贴壁后,加入抗生素筛选.筛选时间和浓度视细胞而定.一般G418一个星期作用,

且效率低,大概只有1%.病毒转染：先要用包装细胞,一般为293细胞,包装出病毒,再用病毒转染目的细胞.包装病毒视不同类型的病毒而定,一般要35天的时间.包装好的病毒要测滴度,根据滴度决定转染目的细胞的病毒量.转染目的细胞12天后加抗生素筛选得到稳定细胞株.病毒转染得到稳定细胞株的效率高,只是步骤繁琐.现在很多家公司提供构建稳定细胞株的技术服务,

慢病毒（Lentivirus）载体是以HIV1（人类免疫缺陷I型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。特点：1、区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力，常用于感染难转染的细胞，如原代细胞、神经元细胞、干细胞、不分化细胞、心肌细胞、肝细胞、内皮细胞、肿瘤细胞，且效率近100%2、可装载DNA片段容量高达5kb3、目的基因进入到宿主细胞之后，经过反转录，整合到基因组，形成稳定遗传物质，使得目的基因在细胞中可稳定长期表达。

利用逆转录机制构建自我失活(SIV)的HIV1来源的载体,一旦转移到靶细胞后,它就丧失了病毒长末端重复的转录能力,减少了产生重组病毒的机会,并避免了与启动子干扰的问题。5、目前比较广泛采用的第三代包装系统四质粒系统只含有HIV1共9个基因中的3个，即gag、pol、rev，由于HIV1基因组成分中60%被去除,因此父代病毒无法复制，是目前重组系数最低的一个慢病毒包装系统，至今未见重组报道。